果膠酶（pectinase）檢測試劑盒(微量法100T/48S)
| 貨號 | SH0505 | 售價（元） | 1200 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號 |
- 產品簡介
- 相關產品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0505 |
果膠酶（pectinase）檢測試劑盒(微量法100T/48S) |
100T/48S |
測定意義：
果膠酶（pectinase）是一類分解果膠質酶類的總稱，包括原果膠酶，果膠酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類，廣泛存在于植物果實和微生物中，主要用于食品、釀酒、環(huán)保、醫(yī)藥、紡織及日化用品行業(yè)。
測定原理：
果膠酶水解果膠生成半乳糖醛酸，具有還原性醛基，與DNS試劑反應生成紅棕色物質，在540nm有特征吸收峰，測定540nm處吸光值變化可計算得果膠酶活性。
試劑組成和配制：
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產品名稱 |
SH0505-100T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
20ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
2瓶 |
4℃ |
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試劑三：液體 |
20ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×2瓶，4℃保存；臨用前加入7.5ml試劑一，50℃加熱溶解，用不完的試劑4℃保存一周。
需自備儀器和用品：
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
酶液提?。?/span>
1、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃離心10min，取上清置于冰上待測。
3、細胞培養(yǎng)液等：直接檢測。
測定步驟：
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對照管 |
測定管 |
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試劑二（μl） |
120 |
120 |
50℃水浴溫育5min
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樣本（μl） |
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30 |
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煮沸樣本（μl） |
30 |
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混勻，50℃水浴反應30min
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試劑三（μl） |
150 |
150 |
沸水浴5min，冰浴冷卻終止反應，8000g，4℃，離心10min，蒸餾水調零，取上清于微量石英比色皿或96孔板測定540nm處吸光值A，△A=A測定管-A對照管。每個測定管需設一個對照管。
注意事項：
1、試劑二若有沉淀析出，請置于50℃加熱溶解。
2、測定之前請先做預實驗，如果吸光值較高或較低，請用提取液做適當的稀釋或者加大樣本量，并在計算公式中乘以稀釋倍數或者以實際加入的樣本體積參與計算。
煮沸樣本建議在沸水中煮沸10分鐘，以將酶徹底滅活。
酶活性計算公式：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 3.9642x - 0.008；R2 = 0.9996；x為標準品濃度，mg/ml；y為吸光值。
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每毫克蛋白每小時分解果膠產生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr
2．按照樣本質量計算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每克樣本每小時分解果膠產生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h /g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷W
3. 按細胞數量計算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每104細胞每小時分解果膠產生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h /104cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷細胞數量
4．細胞培養(yǎng)液
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時分解果膠產生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h /ml）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷V樣÷T=2.523×(ΔA+0.008)
V反總：反應總體積，0.15ml；V樣：反應中樣本體積，0.03ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質量，g；T：反應時間，0.5h
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 1.9821x - 0.008，R2 = 0.9996；x為標準品濃度，mg/ml；y為吸光值。
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每毫克蛋白每小時分解果膠產。生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h/mg prot）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr
2．按照樣本質量計算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每克樣本每小時分解果膠產生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h/g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷W
3. 按細胞數量計算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每104細胞每小時分解果膠產生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h /104cell）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×細胞數量÷V樣總）÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷細胞數量
4．細胞培養(yǎng)液
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時分解果膠產生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h/ml）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷V樣÷T=5.045×(ΔA+0.008)
V反總：反應總體積，0.15ml；V樣：反應中樣本體積，0.03ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質量，g；T：反應時間，0.5h